凱氏定氮儀在有機蛋白質(zhì)檢測的應用分析
來源： http://hostingz.cn/ 類別：實用技術 更新時間：2015-04-30 閱讀次
凱氏定氮儀用凱氏方法檢測谷物、食品、飼料、水、土壤、淤泥、沉淀物和化學品中的氨、蛋白質(zhì)氮含量、酚、揮發(fā)性脂肪酸、氰化物、二氧化硫、乙醇等含量。具有相當好的性價比，僅僅滴定過程需要人工操作一下，非常適合實驗室及檢驗機構常規(guī)檢測。凱氏定氮儀廣泛用于食品、農(nóng)作物、種子、土壤、肥料等樣品的含氮量或蛋白質(zhì)含量分析。蛋白質(zhì)是含氮的有機化合物。食品與硫酸和催化劑一同加熱消化，使蛋白質(zhì)分解，分解的氨與硫酸結合生成硫酸銨。然后堿化蒸餾使氨游離，用硼酸吸收后再以硫酸或鹽酸標準溶液滴定，根據(jù)酸的消耗量乘以換算系數(shù)，即為蛋白質(zhì)含量。
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4
反應式為：
2NH2+H2S04+2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3，收集于H3BO3溶液中
反應式為：
�。∟H4）2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3＝（NH4）2B4O7+5H2O
3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標準溶液滴定，根據(jù)HCI消耗的量計算出氮的含量，然后乘以相應的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量
反應式為：
�。∟H4）2B4O7+H2SO4+5H2O＝（NH4）2SO4+4H3BO3
（NH4）2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3>凱氏定氮儀的作用
在消化過程中要時常轉動燒瓶，使全部樣品都浸在消化液中。當消化液呈清澈淡藍色時即告消化結束。時間一般在5~6小時！若樣品中含賴氨酸或組氨酸較多時，消化時間需要延長1~2倍。因為這兩種氨基酸中的氮在短時間內(nèi)不易消化完全。
蒸餾采用凱氏定氮儀。
1、洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑（取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示劑約1毫升，搖勻后呈紫紅色即可；混合指示劑：50毫升0.1%甲烯藍乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇，存于棕色瓶中）檢測是否清洗干凈。干凈標準：指示劑不變色。
2、樣品和空白的蒸餾：取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應室，關閉加樣口，另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端。取30%氫氧化鈉（W/W）溶液約10毫升，從加樣口緩慢加入，當未加完時關閉，并加入約3毫升蒸餾水，再繼續(xù)緩慢加入一半后關閉，讓剩下的水作液封。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱（注：在清洗儀器完畢后應拿走加熱器），待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始計時，蒸餾5分鐘，然后移動三角瓶使液面離開冷凝管口約1厘米，并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周，繼續(xù)蒸餾1分鐘�？瞻淄瑯�。
3、清洗儀器：同上，不必用指示劑。
滴定用0.0100mol/L標準鹽酸（要標定，費時）滴定三角瓶中收集的氨，直至硼酸指示劑由綠變紫紅。
1.有機物中的胺根在強熱和CuSO4，濃H2SO4作用下，硝化生成（NH4）2SO4
反應式為：
2NH2+H2S04+2H＝（NH4）2S04（其中CuSO4做催化劑）
2.在凱氏定氮器中與堿作用，通過蒸餾釋放出NH3，收集于H3BO3溶液中
反應式為：
�。∟H4）2SO4+2NaOH＝2NH3+2H2O+Na2SO4
2NH3+4H3BO3＝（NH4）2B4O7+5H2O
3.用已知濃度的H2SO4（或HCI）標準溶液滴定，根據(jù)HCI消耗的量計算出氮的含量，然后乘以相應的換算因子，既得蛋白質(zhì)的含量
反應式為：
�。∟H4）2B4O7+H2SO4+5H2O＝（NH4）2SO4+4H3BO3
（NH4）2B4O7+2HCl+5H2O＝2NH4Cl+4H3BO3>凱氏定氮儀的作用
在消化過程中要時常轉動燒瓶，使全部樣品都浸在消化液中。當消化液呈清澈淡藍色時即告消化結束。時間一般在5~6小時！若樣品中含賴氨酸或組氨酸較多時，消化時間需要延長1~2倍。因為這兩種氨基酸中的氮在短時間內(nèi)不易消化完全。
蒸餾采用凱氏定氮儀。
1、洗滌蒸餾儀：用硼酸指示劑（取100毫升2%硼酸溶液，滴加混合指示劑約1毫升，搖勻后呈紫紅色即可；混合指示劑：50毫升0.1%甲烯藍乙醇+200毫升0.1%甲基紅乙醇，存于棕色瓶中）檢測是否清洗干凈。干凈標準：指示劑不變色。
2、樣品和空白的蒸餾：取2毫升稀釋消化液至加樣口加入反應室，關閉加樣口，另取1個裝硼酸指示劑的三角瓶接于冷凝管下端。取30%氫氧化鈉（W/W）溶液約10毫升，從加樣口緩慢加入，當未加完時關閉，并加入約3毫升蒸餾水，再繼續(xù)緩慢加入一半后關閉，讓剩下的水作液封。將加熱器重新放在蒸汽發(fā)生器下加熱（注：在清洗儀器完畢后應拿走加熱器），待三角瓶中液體由紫紅變成鮮綠色起開始計時，蒸餾5分鐘，然后移動三角瓶使液面離開冷凝管口約1厘米，并用少量蒸餾水洗滌冷凝管口外周，繼續(xù)蒸餾1分鐘�？瞻淄瑯�。
3、清洗儀器：同上，不必用指示劑。
滴定用0.0100mol/L標準鹽酸（要標定，費時）滴定三角瓶中收集的氨，直至硼酸指示劑由綠變紫紅。
